本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
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大鼠白細(xì)胞介素6（IL-6）ELISA檢測試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ ELISA ） 。 往預(yù)先包被 白細(xì)胞介素 6 （ IL-6 ） 抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品 、 HRP 標(biāo)記的檢測抗體 ， 經(jīng)過溫育并徹底洗滌 。用底物 TMB 顯色 ，TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色 ， 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 白細(xì)胞介素 6 （ IL-6 ） 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（ OD 值 ） ，計(jì)算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清 ： 使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管 ， 操作過程中避免任何細(xì)胞刺激 ， 收集血液后 ， 3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿 ： EDTA 、 檸檬酸鹽或肝素抗凝 。 3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清 。
3. 細(xì)胞上清液： 3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿 ： 將組織加入適量生理鹽水搗碎 。 3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。
5. 保存 ： 如果樣本收集后不及時(shí)檢測 ， 請按一次用量分裝 ， 凍存于-20 ℃ ，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍 。
自備物品
1. 酶標(biāo)儀（ 450nm ）
2. 高精度加樣器及槍頭 ： 0.5-10uL 、 2-20uL 、 20-200uL 、 200-1000uL
3. 37 ℃ 恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在 2-8 ℃ ，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中 ， 密封 （ 低溫干燥 ） 保存 。
3. 濃度為 0 的 S0 號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，*終結(jié)果乘以 5 才是樣本實(shí)際濃度 。
4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 96孔配置 48孔配置 備注
微孔酶標(biāo)板 12 孔 × 8 條 12 孔 × 4 條 無
標(biāo)準(zhǔn)品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 無
樣本稀釋液 6 mL 3 mL 無
檢測抗體 -HRP 10mL 5mL 無
20 × 洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋
底物 A 6mL 3mL 無
底物 B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2 張 2 張 無
說明書 1 份 1 份 無
自封袋 1 個(gè) 1 個(gè) 無
注：標(biāo)準(zhǔn)品（ S0-S5 ）濃度 依次 為： 0 、 10 、 20 、 40 、 80 、 160 p g/mL
試劑的準(zhǔn)備
20 × 洗滌緩沖液的稀釋 ： 蒸餾水按 1 ： 20 稀釋 ， 即 1 份的 20 × 洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350 μ L ，浸泡 1min ，洗板 5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條 ， 剩余板條用自封袋密封放回 4 ℃ 。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔 ， 標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn) 品 50 μ L ；
3. 樣本孔先加 待測樣本 10 μ L ，再 加樣本稀釋液 4 0 μ L ； 空白孔不加。
4. 除空白孔外， 標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（ HRP ）標(biāo)記的檢測抗體 100 μ L ，用封板膜封住反應(yīng)孔， 37 ℃ 水浴鍋或恒溫箱溫育 60min 。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min ，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板 ） 。
6. 每孔加入底物 A 、 B 各 50 μ L ， 37 ℃ 避光孵育 15min 。
7. 每孔加入終止液 50 μ L ， 15min 內(nèi) ， 在 450nm 波長處測定各孔 的OD 值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在 Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對 應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo) ， 繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線 ， 按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或 人 體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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