遠慕生物：ACK紅細胞裂解液說明書一、ACK紅細胞裂解液簡介：
去除紅細胞的方法有多種，上海遠慕生物的ACK紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也稱為ACK Lysis Buffer，是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的
溶液，其主要有效成分為氯化銨，ACK Lysis Buffer經(jīng)過優(yōu)化配方，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。
遠慕生物 ACK Lysis Buffer對于裂解、去除有細胞核紅細胞，例如鳥或禽類的紅細胞，效果不佳，裂解類似細胞時，不建議采用。本裂解液經(jīng)過濾除菌，經(jīng)過ACK Lysis Buffer處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的
細胞培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或
蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。
二、ACK紅細胞裂解液組成：
ACK Lysis Buffer 100ml 500ml 4℃ 密閉
使用說明書
1份
主要成分：主要由NH4Cl組成，pH7.2。
三、自備材料：
1、 胰蛋白酶，亦可采購遠慕的胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)(CC0130) 2、
離心機3、 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液
四、ACK紅細胞裂解液操作步驟（僅供參考）：
（一）組織細胞樣本的常規(guī)操作
1、制備細胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。
2、裂解: 加入3～5倍細胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、離心: 4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清。如無低溫離心機本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3各一次。
5、洗滌：根據(jù)具體實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g離心2～3min，棄上清，離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應大于細胞沉淀體積的5倍以上。 6、如有必要，重復上述步驟5一次，共洗滌1～2次。
7、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
（二）組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)
1、制備細胞懸液：新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。
2、裂解：加入細胞5倍細胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、 加入15～20ml的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。 4、 離心：4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清，本步驟亦可在室溫下操作。 5、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2～4各一次。 6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
（三）血液樣本的常規(guī)操作
1、取新鮮抗凝血，400～500g離心5min，離心棄上清。
2、 裂解: 加入6～10倍細胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～5min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解1～2min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4～5min，并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解）
3、離心: 4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清。如無低溫離心機本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。
5、洗滌: 根據(jù)具體實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g離心2～3min，棄上清，離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應大于細胞沉淀體積的5倍以上。 6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
注意： 對于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，加入10倍血液體積的ACK Lysis Buffer進行第2步操作，并在4℃或室溫裂解4～15min。對于鼠的血液，裂解4～5min已經(jīng)足夠；對于人的外周血，宜延長裂解時間至10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。
（四）血液樣本的快速操作(無需洗滌)
1、新鮮抗凝血中加入10倍體積的ACK Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解4～15min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解4～5min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。
2、加入20～30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。 3、400～500g離心5min，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。 4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。 5、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
五、注意事項：
1、制備細胞懸液是應根據(jù)具體實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。
2、后續(xù)試驗如果是用于細胞培養(yǎng)，操作過程中應注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內操作。 3、離心步驟盡量在4℃離心機上操作。
4、對于常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。
5、離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的檢測。
6、如果經(jīng)過ACK Lysis Buffer處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用DEPC處理的溶液，即無需在該操作中特意去除RNase。 7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
六、有效期： 6個月有效。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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