慢病毒包裝的作用和關(guān)鍵點說明_技術(shù)文章

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慢病毒包裝的作用和關(guān)鍵點說明
閱讀次數(shù)：292 發(fā)布時間：2023/1/31 10:40:12

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　　慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細胞，如原代細胞等，并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中，從而大大增加了轉(zhuǎn)染效率，并且能夠在細胞系中穩(wěn)定表達若干代，可以進行穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的篩選。因為是隨機整合，也有不確定因素，有些公司還能提供定點整合技術(shù)，將靶基因定點整合到基因組特定的部位，從而保/證其高/效表達并且對細胞不產(chǎn)生隨機整合可能產(chǎn)生的傷害。

慢病毒包裝質(zhì)�？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝shRNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細胞，在細胞中進行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細胞的感染，目的基因進入到宿主細胞之后，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，整合到基因組，從而高水平的表達效應(yīng)分子。

慢病毒包裝的幾個關(guān)鍵點：

其關(guān)鍵點是細胞因素、載體系統(tǒng)（盡量使用成熟的商業(yè)化載體系統(tǒng)）、構(gòu)建重組的質(zhì)粒正確與否、質(zhì)粒抽提純化情況、包裝轉(zhuǎn)染控制（24、48小時的細胞及熒光狀態(tài)判斷）、目的基因?qū)Σ《景b影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會影響到是否能包裝成功）。

純化后的慢病毒保存方法：慢病毒純化后的病毒用無血清的DMEM保存就可以了，一般放在-80度進行長/久保存。如果收集的上清不想立即純化可先放在-80度，等下次收集的一起純化。目的蛋白在包裝細胞中或者滴度測定細胞中會表達的，滴度測定就是根據(jù)目的蛋白表達情況來進行操作的。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司