如何確定一抗的稀釋比例？_技術(shù)文章_上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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如何確定一抗的稀釋比例？
閱讀次數(shù)：479 發(fā)布時間：2023/1/11 10:24:01

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如果說明書中有推薦的稀釋比例，請按照該稀釋比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。但是由于標(biāo)本類型、實(shí)驗(yàn)條件、操作環(huán)境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。實(shí)驗(yàn)者需要在推薦濃度周圍進(jìn)行多個濃度梯度的實(shí)驗(yàn)，從中發(fā)現(xiàn)/佳的稀釋比例。

如果說明書沒有推薦稀釋比例，僅注明“Use at an assay dependent dilution”，就需要做大量的預(yù)實(shí)驗(yàn)來摸索/佳的比例了。下表列出的純化抗體抗體用于不同實(shí)驗(yàn)方法時常用的工作濃度，可以作為預(yù)實(shí)驗(yàn)的參考。未純化的抗體一般在說明書中不會標(biāo)明抗體的濃度，因?yàn)榇蟛糠秩寡�、培養(yǎng)上清或腹水形式的產(chǎn)品濃度都是沒有經(jīng)過測定的。如果未純化抗體產(chǎn)品的說明書中沒有標(biāo)明其中特異性抗體的濃度，實(shí)驗(yàn)者可以參考下表中“估計濃度”確定各種實(shí)驗(yàn)稀釋比例。

請記住，下表中的各種稀釋比例和工作濃度僅僅是作為一個起始點(diǎn)，需要根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果來進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。/好以此起點(diǎn)作一系列的濃度，從中確定/佳的工作濃度和稀釋比例！

	組織培養(yǎng)上清	腹水	全抗血清	純化抗體
WB / dot blot	1/100	1/1000	1/500	1 ug/ml
IHC / ICC	neat - 1/10	1/100	1/50 - 1/100	5 ug/ml
EIA / ELISA	1/1000	1/10000	1/5000	0.1 ug/ml
FC	1/100	1/1000	1/500	1 ug/ml
IP		1/100	1/50-1/100	1 - 10 ug/ml
Concentration estimate	1 - 3 mg/ml	5 - 10 mg/ml	1 - 10 mg/ml