質(zhì)粒純度不高解決辦法
1.混有蛋白：不要使用過多菌體。經(jīng)溶液P1、P2、P3處理，離心后溶液應(yīng)為澄清的，如果還混有微小蛋白懸浮物可再次離心去除后再進(jìn)行下一步驟。
2. 混有RNA：RNaseA處理不徹/底，請(qǐng)減少菌體用量或加入溶液P3之后室溫放置一段時(shí)間。如果溶液P1已保存6個(gè)月以上，請(qǐng)?jiān)谌芤篜1中添加RNaseA。
3. 混有基因組DNA：加入溶液P2和P3后應(yīng)溫和混勻，如果劇烈振蕩，可能把基因組DNA剪切成碎片從而混雜在質(zhì)粒中。如果加入溶液P2后過于粘稠，無法溫和混勻，請(qǐng)減少菌體用量。細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞和DNA的降解，培養(yǎng)時(shí)間不要超過16小時(shí)。
4. P3溶液加入時(shí)間過長(zhǎng)：P3溶液加入后，放置時(shí)間不要太長(zhǎng)，否則有可能會(huì)產(chǎn)生小片段DNA污染。
5. 含大量核酸酶的宿主菌：宿主菌含大量核酸酶，在質(zhì)粒提取過程中降解質(zhì)粒DNA，影響提取質(zhì)粒DNA的完整性，/好選用不含核酸酶的大腸桿菌宿主菌，如DH5α和Top10。
6. 質(zhì)粒的二聚體和多聚體形式：質(zhì)粒復(fù)制過程中形成的，與宿主菌相關(guān)，電泳可檢測(cè)出多條條帶，單酶切處理后可變成單一條帶。
質(zhì)粒純度不高解決辦法
1.混有蛋白：不要使用過多菌體。經(jīng)溶液P1、P2、P3處理，離心后溶液應(yīng)為澄清的，如果還混有微小蛋白懸浮物可再次離心去除后再進(jìn)行下一步驟。
2. 混有RNA：RNaseA處理不徹/底，請(qǐng)減少菌體用量或加入溶液P3之后室溫放置一段時(shí)間。如果溶液P1已保存6個(gè)月以上，請(qǐng)?jiān)谌芤篜1中添加RNaseA。
3. 混有基因組DNA：加入溶液P2和P3后應(yīng)溫和混勻，如果劇烈振蕩，可能把基因組DNA剪切成碎片從而混雜在質(zhì)粒中。如果加入溶液P2后過于粘稠，無法溫和混勻，請(qǐng)減少菌體用量。細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞和DNA的降解，培養(yǎng)時(shí)間不要超過16小時(shí)。
4. P3溶液加入時(shí)間過長(zhǎng)：P3溶液加入后，放置時(shí)間不要太長(zhǎng)，否則有可能會(huì)產(chǎn)生小片段DNA污染。
5. 含大量核酸酶的宿主菌：宿主菌含大量核酸酶，在質(zhì)粒提取過程中降解質(zhì)粒DNA，影響提取質(zhì)粒DNA的完整性，/好選用不含核酸酶的大腸桿菌宿主菌，如DH5α和Top10。
6. 質(zhì)粒的二聚體和多聚體形式：質(zhì)粒復(fù)制過程中形成的，與宿主菌相關(guān)，電泳可檢測(cè)出多條條帶，單酶切處理后可變成單一條帶。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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