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小鼠膠質細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）ELISA試劑盒說明書本

Elisa kit規(guī)格：48孔配置/96孔配置

標準品稀釋液：1.5ml×1瓶 

酶標試劑：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96） 

【小鼠膠質細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）ELISA試劑盒】本試劑僅供研究使用  

計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查 出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣 品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 

小鼠膠質細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）ELISA試劑盒 試劑盒組成：

封板膜:2片（48）/2片（96） 

說明書:1份

密封袋:1個 

標準品：   2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶  2-8℃保存 

酶標包被板:  1×48     1×96         2-8℃保存

樣品稀釋液: 3ml×1瓶  6 ml×1瓶     2-8℃保存 

顯色劑A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存

顯色劑B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存 

終止液:     3ml×1瓶 6ml×1瓶     2-8℃保存 

濃縮洗滌液:（20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存 

【小鼠膠質細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）ELISA試劑盒】實驗原理：

服務承諾：  

供貨期：款到發(fā)貨。

工作時間內免費的技術咨詢和指導 。請來電咨詢

為客戶提供來樣檢測服務，限度實驗結果的有效性(免費代測)。 

保存條件及有效期： 

試劑盒保存：2-8℃| 有效期：6個月  

【小鼠膠質細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）ELISA試劑盒】樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存 過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。 

2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右 （2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。 

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀 形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細 收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。 通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上 清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。標本�?nbsp;化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分 鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗， 可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融. 

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 

操作步驟 

    標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在、第二孔中分別加標準品100μl ，然后在、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到 第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各 取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul ，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標 準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別 加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度 分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。

    加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在 酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍） 。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

    溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

    洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍 干。

    加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

    溫育：操作同3。

    洗滌：操作同5。

    顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 

    終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

    測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘 以內進行。

【小鼠膠質細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）ELISA試劑盒】注意事項： 

    試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條 應裝入密封袋中保存。

    濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

    各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分 鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

    請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品 孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù) （×n×5）。

    封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    底物請避光保存。

    嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

    所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    本試劑不同批號組分不得混用。 

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 

試劑盒性能： 

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。 

2.批內與批見應分別小于9%和11% 

檢測范圍： 

0.2IU/L - 6IU/L

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司