Western blot出現(xiàn)兩個(gè)目標(biāo)蛋白條帶？_技術(shù)文章

技術(shù)文獻(xiàn)

Western blot出現(xiàn)兩個(gè)目標(biāo)蛋白條帶？
閱讀次數(shù)：1233 發(fā)布時(shí)間：2022/12/16 9:55:02

分享到：

1.因?yàn)閃B的一抗識(shí)別的蛋白質(zhì)的表位是順序表位，不是空間表位，所以WB狀態(tài)下的抗原-抗體識(shí)別，與非變性的生理?xiàng)l件下的抗原-抗體識(shí)別不同。

2.WB之，先用分子篩純化同時(shí)也是檢測(cè)一下目的蛋白產(chǎn)物是否成功。也就是目的蛋白是否成功表達(dá)了，而且在提取后穩(wěn)定存在了。

3.非特異性的條帶分子量偏大可能是SDS PAGE出的問題，膠的濃度不合適或者樣品溶解度不夠或者電泳時(shí)間不合適等，造成了目的條帶的表觀質(zhì)量變大。

4.三個(gè)非特異性的分子量偏大條帶可能是目的蛋白在SDS PAGE出的問題出了問題，另外兩個(gè)帶可能本來就是雜帶了�？梢曰厥蘸髮�(duì)三條帶用質(zhì)譜檢測(cè)精/確的分子量加以確定。

5.三個(gè)非特異性的分子量偏大條帶至少應(yīng)該有雜帶，雜帶出現(xiàn)而且與一抗相互作用，那么只能說雜帶的順序表位也能被一抗識(shí)別，必須更換一性更高的抗體。

6.還有考慮鎳柱親和分離的問題，是不是獲得了你的需要的目的蛋白質(zhì)。

1.因?yàn)閃B的一抗識(shí)別的蛋白質(zhì)的表位是順序表位，不是空間表位，所以WB狀態(tài)下的抗原-抗體識(shí)別，與非變性的生理?xiàng)l件下的抗原-抗體識(shí)別不同。

2.WB之，先用分子篩純化同時(shí)也是檢測(cè)一下目的蛋白產(chǎn)物是否成功。也就是目的蛋白是否成功表達(dá)了，而且在提取后穩(wěn)定存在了。

3.非特異性的條帶分子量偏大可能是SDS PAGE出的問題，膠的濃度不合適或者樣品溶解度不夠或者電泳時(shí)間不合適等，造成了目的條帶的表觀質(zhì)量變大。

4.三個(gè)非特異性的分子量偏大條帶可能是目的蛋白在SDS PAGE出的問題出了問題，另外兩個(gè)帶可能本來就是雜帶了。可以回收后對(duì)三條帶用質(zhì)譜檢測(cè)精/確的分子量加以確定。

5.三個(gè)非特異性的分子量偏大條帶至少應(yīng)該有雜帶，雜帶出現(xiàn)而且與一抗相互作用，那么只能說雜帶的順序表位也能被一抗識(shí)別，必須更換一性更高的抗體。

6.還有考慮鎳柱親和分離的問題，是不是獲得了你的需要的目的蛋白質(zhì)。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司