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可見(jiàn)分光光度法的基本原理利用的是朗伯—比耳定律。

布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度成正比：A∝b 。

1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有成正比的關(guān)系：A∝ c 。

二者的結(jié)合稱為朗伯—比耳定律：當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)均勻、非散射的稀溶液時(shí)，溶液對(duì)光的吸收程度與溶液的濃度及液層厚度的乘積成正比。

可見(jiàn)分光光度法的基本原理詳解：

1、當(dāng)一束強(qiáng)度為I0的單色光垂直照射某物質(zhì)的溶液后,由于一部分光被體系吸收,因此透射光的強(qiáng)度降至I,則溶液的透光率T為:T=(I0-I)/I0

2、根據(jù)朗伯(Lambert)-比爾(Beer)定律:A=abc。

式中A為吸光度，b為溶液層厚度（cm），c為溶液的濃度（g/dm^3)， a為吸光系數(shù)。其中吸光系數(shù) 與溶液的本性、溫度以及波長(zhǎng)等因素有關(guān)。溶液中其他組分（如溶劑等）對(duì)光的吸收可用空白液扣除。

3、由上式可知，當(dāng)溶液層厚度b和吸光系數(shù)a固定時(shí)，吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。在定量分析時(shí)，先需要測(cè)定溶液對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收情況（吸收光譜），從中確定/大吸收波長(zhǎng) ，然后以此波長(zhǎng) 的光為光源，測(cè)定一系列已知濃度c溶液的吸光度A，作出A~c工作曲線。在分析未知溶液時(shí)，根據(jù)測(cè)量的吸光度A，查工作曲線即可確定出相應(yīng)的濃度。這便是分光光度法測(cè)量濃度的基本原理。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司