技術(shù)文獻(xiàn)
一、用途
本產(chǎn)品主要適用于組織切片及脫落細(xì)胞染色。
二、原理
核酸等電點為PH1.5-2.0,當(dāng)PH>2.0時,能結(jié)合帶正電荷的蘇木素。染料中的伊紅、亮綠、橙黃等為酸性染料,俾士麥棕為鹽基性染料,能與細(xì)胞漿中相反電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合,從而染出鮮艷的結(jié)構(gòu)。
三、試劑盒組成
①、 蘇木素染色液:1×250ml; ②、5%鹽酸液:1×25ml;
③、飽和碳酸鋰:1×5ml; 、、橙黃G-6染色液:1×250ml;
⑤、亮綠染色液:1×100ml; 、蕖①率葵溩厝旧海1× 22ml;
⑦、伊紅染色液:1×100ml; ⑧、5%磷鎢酸:1× 10ml。
用戶須自備95%酒精、無水酒精、二甲苯、樹膠。
EA-36染色液配制:臨用前將亮綠染色液100ml、俾士麥棕染色液22ml、伊紅染色液100ml混勻,邊攪拌邊加入5%磷鎢酸10ml,充分混勻后即為EA-36染色液。注意:此液配成后*佳使用期為1-2個月,每次使用亦應(yīng)攪拌均勻。
0.5%稀鹽酸液配制:取5%鹽酸液25ml加水至250ml, 混勻即可。
稀碳酸鋰液配制:在250 ml蒸餾水中加入飽和碳酸鋰6滴,混勻即可。
梯度酒精液配制:80%酒精液:95%酒精84 ml、蒸餾水16 ml混勻;
70%酒精液:95%酒精74 ml、蒸餾水26 ml混勻;
50%酒精液:95%酒精53 ml、蒸餾水47 ml混勻。
四、染色方法
1、將未干的涂片置95%酒精中,固定15-30分鐘。
2、加水:將已固定的涂片依次置80%、70%、50%酒精、蒸餾水中各1分鐘。
3、染核:置蘇木素染色液中2-10分鐘(視溫度酌情調(diào)整),蒸餾水沖凈。
4、分色:置0.5%稀鹽酸液中數(shù)秒,以涂片轉(zhuǎn)成淡紅色為度,立即以蒸餾水沖凈。
5、藍(lán)化:置稀碳酸鋰液中約1分鐘,以涂片轉(zhuǎn)成藍(lán)色為度,以蒸餾水沖凈。
6、脫水:依次置50%、70%、80%酒精液中半分鐘,再置95%酒精液中2分鐘。
7、染漿:置橙黃G-6染色液中2分鐘,再置95%酒精液中迅速洗滌2-3次,以去掉多余的橙黃G-6。
8、再染漿:置EA-36染色液中2-5分鐘,再置兩缸95%酒精液中分別洗滌1-2次。
9、去水:置兩缸無水酒精中分別洗滌1-2次。
10、透明:置兩缸二甲苯中分別洗滌1-2次。
11、封片:用樹膠封固涂片。若不需保存標(biāo)本,此步可略。
五、結(jié)果
上皮細(xì)胞:核染藍(lán)紫色,核仁紅色,胞漿依分化高低,分別染成橙黃、粉紅、綠色、淡藍(lán)色。
六、貯存、有效期
本試劑盒應(yīng)置2-25℃、相對濕度40-75%處避光保存,有效期一年。
原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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