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培養(yǎng)基不凝固怎么辦?凝固物質(zhì)又有哪些?
閱讀次數(shù):1574 發(fā)布時(shí)間:2022/10/9 9:40:10
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你知道培養(yǎng)基的凝固物質(zhì)有哪些嗎?跟著遠(yuǎn)慕生物來學(xué)習(xí)一下吧!

常用的凝固物質(zhì)為瓊脂,特殊情況下也可用明膠、卵白蛋白、血清等。

抑制劑和指示劑:用于選擇、鑒定及判斷結(jié)果。

1.抑制劑:必須具有選擇抑制作用。目的在于抑制非檢出菌(非目的菌)的生長(zhǎng),以利于檢出菌(目的菌)的生長(zhǎng)。常用膽鹽、煌綠、亞硫酸鈉、亞硒/酸鈉及一些染料和某些抗生素等。

2.指示劑:在培養(yǎng)基中加入一定種類的指示劑,是為了觀察細(xì)菌是否利用和分解培養(yǎng)基中的糖、醇類。常用的有酚紅、中性紅、甲基紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)、中國藍(lán)等酸堿指示劑。亞甲藍(lán)常用作氧化還原指示劑。

培養(yǎng)基不能凝固的原因

①培養(yǎng)基制備過程中過度加熱

②低pH值造成培養(yǎng)基酸解

③瓊脂使用量不正確

④瓊脂未完/全溶解

⑤培養(yǎng)基成分未充分混勻

培養(yǎng)基的使用

1.瓊脂培養(yǎng)基的融化

將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高壓鍋中的蒸汽)融化。經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)基盡量減少重新加熱的時(shí)間,避免過度加熱。培養(yǎng)基融化后立即移開,室溫靜置片刻(約2min),以免玻璃容器發(fā)生破裂。

融化后的培養(yǎng)基放入47℃~50℃恒溫水浴鍋中保溫,冷卻到47℃~50℃所需的時(shí)間取決于培養(yǎng)基的類型、體積和在水鍋里的分裝量。融化后內(nèi)培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用,放置時(shí)間一般不超過4h。剩余的培養(yǎng)基固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養(yǎng)基,應(yīng)根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),縮短融化后放置的時(shí)間。

將瓊脂培養(yǎng)基倒入類似檢測(cè)培養(yǎng)使用的獨(dú)立容器中,插入溫度計(jì),記錄并保存瓊脂的融化溫度。

加入樣品的培養(yǎng)基應(yīng)將溫度調(diào)節(jié)到44℃~47℃,或按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)節(jié)溫度。

2.培養(yǎng)基的脫氣

必要時(shí),在使用將養(yǎng)基放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15min,加熱時(shí)松開容器蓋子;加熱后蓋緊蓋子,并迅速冷卻至使用溫度。

3.添加成分的加入

對(duì)熱不穩(wěn)定的添加成分應(yīng)在培養(yǎng)基冷卻至47℃~50℃時(shí)加入,滅菌的添加成分加入應(yīng)冷卻至室溫,避免冷的液體會(huì)造成瓊脂凝膠或形成片狀物。將添加成分慢加入培養(yǎng)基并充分混勻,盡快分裝到待用的容器中。

4.培養(yǎng)基的棄置

所有污染和未使用的培養(yǎng)基的棄置應(yīng)采用安全的方式,并符合相關(guān)法律法規(guī)的規(guī)定。

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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